来源于Serratia proteamaculans的几丁质内 切酶SpchiA的克隆表达和酶学性质研究开题报告

 2023-04-17 16:56:50

1. 研究目的与意义(文献综述包含参考文献)

一、几丁质酶简介广义几丁质酶的概念(chitinase)包括所有与几丁质降解有关的酶,如脱乙酰酶(EC.3.5.1.41)、壳聚糖酶(EC.3.2.1.132)、几丁质酶(EC.32.1.14)和N-乙酰氨基葡萄糖苷酶(EC32152)。

狭义概念上的几丁质酶是指催化水解至少含有一个N-乙酰葡萄糖胺基团糖苷键的酶。

包括内切型几工酶和外切型几丁酶,内切入丁质酶在糖链内部随机地断裂糖苷键,而外切几丁质酶则是从糖链的非还原端以几丁二糖为单位依次水解。

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2. 研究的基本内容、问题解决措施及方案

课题研究目标:(1)基于几丁质酶高产菌株Serratia proteamaculans的全基因组,克隆表达出几丁质酶ChiA;(2)探究ChiA的酶学性质如最适温度、pH;温度、pH稳定性等;(3)在确定其最适反应条件情况下,将ChiA应用于水解几丁质制备GlcNAc及几丁寡糖的研究。

主要研究方法及实施方案: (1)本论文拟利用分子生物学手段,通过设计引物克隆出几丁质酶基因ChiA,并将其构建在载体pET28a ( )上。

将重组质粒pET28a-ChiA导入克隆宿主DH5α中,经过菌落PCR检出阳性转化子后,提取质粒送公司测序,将测序正确的重组质粒导入感受态细胞BL21(DE3)中。

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