猪细小病毒在ST细胞中增殖规律的初步研究开题报告

 2023-02-12 12:26:55

1. 研究目的与意义、国内外研究现状(文献综述)

猪细小病毒(Porcine parvovirus,PPV)是引起母猪繁殖障碍的主要病原之一。

一般条件下,仅怀孕母猪出现典型症状,表现为流产、死胎、屡配不孕等特征。

此病最早见于1967年英国有报道过[1]。

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2. 研究的基本内容和问题

目标:分析获得猪细小病毒在ST细胞中的增殖规律内容:将猪细小病毒AV30株接种于ST细胞,于不同时间点收获病毒并测其毒价与病毒拷贝数,以此分析该病毒的增殖规律拟解决的关键问题:1.ST细胞的细胞传代培养2.病毒拷贝数的荧光定量测定3.病毒的毒价测定

3. 研究的方法与方案

方法细胞培养接毒用DM培养液加10%胎牛血清作为ST细胞的培养液(pH7.2),置37 ℃培养箱中培养;在细胞传代时,用0.1%胰酶消化细胞,吹散细胞,传代7h后,按1%比例接种PPV病毒。

病毒拷贝数的荧光定量测定分别回收12h、24h、36h、48h、60h、72h、84h的病毒液冻存。

按照病毒基因组DNA提取试剂盒说明提取上清与细胞中DNA,建立实时PCR方法检测病毒滴度,并折算为细胞病毒的总拷贝数。

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4. 研究创新点

利用ST细胞进行PPV病毒增殖用Realtime-PCR仪进行核酸拷贝数测定从而反映增殖规律

5. 研究计划与进展

3月 联系实习导师,地点进行实验条件准备,熟悉实验环境、基本操作 撰写开题计划,列出详细的实习计划可进行少量的预实验,4月 练习ST细胞的培养 当能稳定的传代细胞时(保证细胞状态良好时,进行PPV病毒的接种实验并取样检测) 接种PPV 开始实验5月 完善实验条件 分析实验结果 撰写毕业论文

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