1. 研究目的与意义、国内外研究现状(文献综述)
多聚腺苷二磷酸核糖基化是由种多聚腺苷二磷酸核糖聚合酶 (PARP)家族所催化的一类必不可少的蛋白质翻译后修饰过程。
在该过程中,PARP由特定的DNA激活,对底物烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NAD )进行切割,使其裂解成为烟酰胺和腺苷二磷酸核糖(ADP核糖),并将后者聚合至受体蛋白,通过若干重复反应,即可形成一个线性或分枝结构的ADP核糖聚合物(PAR)。
该聚合物一般含有200个左右的ADP核糖单元,同时具有很高的电负性。
2. 研究的基本内容和问题
研究目标本课题主要目标是发挥电化学检测技术的优势,建立一种简单、无需标记且成本低廉,同时又具有高灵敏度的PARP电化学生物传感器检测方法。
研究内容1、建立电化学生物传感器2、绘制PARP标准检测曲线3、检测实际样品中的PARP拟解决的关键问题1、优化该传感器的检测性能 2、PARP检测标准曲线的绘制
3. 研究的方法与方案
研究的目标、内容和拟解决的关键问题研究目标本课题主要目标是发挥电化学检测技术的优势,建立一种简单、无需标记且成本低廉,同时又具有高灵敏度的PARP电化学生物传感器检测方法。
研究内容1、建立电化学生物传感器2、绘制PARP标准检测曲线3、检测实际样品中的PARP拟解决的关键问题1、优化该传感器的检测性能 2、PARP检测标准曲线的绘制研究方法、技术路线、实验方案及可行性分析研究方法1、经典巯基自组装2、电分析方法技术路线 利用经典巯基自组装的方式将能够与PARP特异结合的单链DNA(c-kit-1)修饰于金电极表面,经处理使c-kit-1形成四聚体构型;与PARP孵育后,加入该酶特定的催化底物NAD ,促使PARP发生自催化产生一条带有高负电荷的聚ADP核糖(PAR);利用PAR的高负电性吸附带正电荷的电信号分子六氨合钌 (RuHex),最后通过电分析方法对电极表面吸附的RuHex进行定量,制定标准曲线,即可实现PARP及其抑制剂3-氨基苯甲酰胺(3-AB)的灵敏检测。
实验方案(1) 金电极的预处理采用经典的预处理方式进行金电极的预处理。
4. 研究创新点
特色或创新之处本研究首次使用电化学生物传感器方法检测PARP,方法简便快速、灵敏度高,可实现对PARP及其抑制剂的无标记检测,简化了实验步骤,避免了标记过程,对各类疾病包括癌症的监控与治疗具有重要意义。
5. 研究计划与进展
2016.09.01-2016.09.15 掌握金电极表面预处理技术 2016.09.15-2016.09.30 通过电化学阻抗谱测量证实电极表面修饰过程 2016.10.01-2016.10.31 优化该传感器的检测性能2016.11.01-2016.11.30 绘制标准曲线2016.12.01-2016.12.31 该传感器特异性和稳定性的验证
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