表达IBDV VP2和鸡C3d基因重组火鸡疱疹病毒的构建开题报告

 2023-02-15 10:13:33

1. 研究目的与意义、国内外研究现状(文献综述)

传染性法氏囊病 (Infectious Bursal Disease, IBD) 是引起我国及世界养禽业经济损失严重的主要传染病之一。

接种疫苗是预防该病最有效的方法。

变异株和超强毒株 (vvIBDV) 的出现使该病的防控难度加大,IBD免疫预防失败已成为禽病防控中的重要问题[1-4]。

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2. 研究的基本内容和问题

研究目标:构建火鸡疱疹病毒重组病毒转移载体pUL45/46-gpt-VP2-C3d,为获得重组火鸡疱疹病毒(rHVT-VP2-C3d)奠定基础。

研究内容: (1)HVT UL45和UL46同源臂(pUL45/46)的构建 (2)哺乳动物细胞基因转移遗传选择标记表达盒(CMV-gpt-SV40 polyA)的构建 (3)IBDV VP2和C3d串联基因表达盒(MCMV-VP2-C3d-BGHpolyA)的构建 (4)火鸡疱疹病毒重组病毒转移载体pUL45/46-gpt-VP2-C3d的构建拟解决的关键问题在使用融合PCR连接UL45和UL46同源臂时,常会出现目的条带浓度较低,难以回收到。

本研究通过使用LAtaq酶(能扩增长片段的taq酶)和降落PCR,最终获得了UL45和UL46同源臂的融合片段。

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3. 研究的方法与方案

研究目标:构建火鸡疱疹病毒重组病毒转移载体pUL45/46-gpt-VP2-C3d,为获得重组火鸡疱疹病毒(rHVT-VP2-C3d)奠定基础。

研究内容: (1)HVT UL45和UL46同源臂(pUL45/46)的构建 (2)哺乳动物细胞基因转移遗传选择标记表达盒(CMV-gpt-SV40 polyA)的构建 (3)IBDV VP2和C3d串联基因表达盒(MCMV-VP2-C3d-BGHpolyA)的构建 (4)火鸡疱疹病毒重组病毒转移载体pUL45/46-gpt-VP2-C3d的构建拟解决的关键问题在使用融合PCR连接UL45和UL46同源臂时,常会出现目的条带浓度较低,难以回收到。

本研究通过使用LAtaq酶(能扩增长片段的taq酶)和降落PCR,最终获得了UL45和UL46同源臂的融合片段。

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4. 研究创新点

(1)构建了的重组火鸡疱疹病毒转移载体含有VP2和C3d串联基因表达盒,C3d分子佐剂可以提高机体对目的基因的特异性免疫水平。

(2)重组火鸡疱疹病毒转移载体中的gpt筛选基因表达盒,可以表达gpt,通过药物可以杀死野生病毒,极大地方便对重组病毒的筛选。

5. 研究计划与进展

2016.9-2016.10 HVT UL45和UL46同源臂(pUL45/46)的构建2016.10-2016.11哺乳动物细胞基因转移遗传选择标记表达盒(CMV-gpt-SV40 polyA)的构建2016.11-2016.12 IBDV VP2和C3d串联基因表达盒(MCMV-VP2-C3d-BGHpolyA)的构建2016.12-2017.1 火鸡疱疹病毒重组病毒转移载体pUL45/46-gpt-VP2-C3d的构建

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