1. 研究目的与意义、国内外研究现状（文献综述）
猪圆环病毒2型(PCV2)是引起世界养猪国家经济损失的重要病原之一。PCV2在临床上会引起多个疾病，如断奶仔猪多系统衰竭综合征、猪皮炎和肾病综合征、繁殖障碍、猪增生性坏死性间质性肺炎、猪呼吸道疾病综合征等。目前，PCV2感染已经遍布全球各个养猪国家，给世界养猪业带来了巨大的经济损失，因此迫切需要建立高效、灵敏的检测方法来控制该病。单克隆抗体的本身的特性使之成为研究该病的有效工具。
最早利用单克隆抗体技术应用于PCV2检测的是McNeilly等[1]。他们利用纯化的PCV2全病毒作为免疫原，通过IFA方法筛选出了14株针对PCV2 Cap蛋白的单克隆抗体，并初步建立了检测PCV2抗原的捕获ELISA方法。后来,Saha等[2]利用制备的单克隆抗体对不同基因亚型PCV2毒株进行了分析，发现某些亚型之间的抗原差异可以用单抗进行鉴别诊断，这为PCV2毒株问的鉴别诊断和疫苗的研究提供了帮助。我国关于PCV2单克隆抗体的制备与应用，最早是在2005年，商绍彬等[3]首次利用原核表达载体pGEX-4T-1中表达了PCV2去核定位信号的衣壳蛋E5(dCap)，免疫小鼠成功获得了5株杂交瘤细胞株，能特异的与PCV2Cap蛋白发生反应，其中3株中和病毒能力。后来，研究者又相继利用原核表达PCV2Cap蛋白[4~6]、纯化PCV2病毒粒子[7~8]真核表达的Cap蛋白等[9~10]为免疫原，成功筛选出针对PCV2 Cap蛋白的特异性单克隆抗体。并利用特异的单克隆抗体进行PCV2 Cap蛋白抗原表位分析、PCV2抗原或抗体检测试剂盒等[7]方面的研究。李益飞等[12]利用大肠杆菌表达的PCV2Rep蛋白为免疫原，制备了针对PCV2Rep蛋白的特异性单克隆抗体，为PCV2 Rep蛋白抗原表位和功能研究奠定了基础。
本研究旨在利用已经制备好的单克隆细胞，体外培养，制备并鉴定腹水。本实验对于制备腹水和杂交瘤上清进行鉴定，并采用多种方法来检测该单克隆细胞株的活力，为今后该病的特异性鉴别诊断奠定了基础。
参考文献
2. 研究的基本内容和问题
1 研究目标
单克隆细胞的体外培养，制备并鉴定腹水，最后采用多种方法来检测该单克隆细胞株的活力，为今后该病的特异性鉴别诊断奠定了基础。
2 研究内容
3. 研究的方法与方案
1 研究方法及实验方案
1.1 杂交瘤细胞复苏培养
杂交瘤细胞从液氮罐中取出后迅速放入已准备好的38-42℃的热水中，迅速搅动使其在1~2min内融化；1000rpm离心10min；在超净台中，将冻存管中上清弃去，轻洗后用含20%胎牛血清的1640营养液将细胞悬起，接到100mL细胞瓶中，补加适量营养液，于37℃、5%CO2、饱和湿度培养箱中培养。每日观察细胞状态，常换液，细胞长满后，传代培养。
4. 研究创新点
本实验所培养的细胞为猪圆环病毒2型单克隆抗体3E5，具有特异性强、能够准确识别抗原物质的细微差别、高灵敏度、能大量制备等特点。并且通过ELASA、原位杂交方法、间接免疫荧光等多种方法来检测该单克隆细胞株的活力。这些单抗的制各与鉴定为PCV2的鉴别诊断及抗原表位研究提供了技术手段，具有重要的应用价值。
5. 研究计划与进展
1 研究计划
2016.09.01~2016.09.30 单克隆抗体体外培养
2016.10.01~2016.10.30 小鼠腹水制备
以上是毕业论文开题报告，课题毕业论文、任务书、外文翻译、程序设计、图纸设计等资料可联系客服协助查找。
