1. 研究目的与意义、国内外研究现状（文献综述）
现阶段的市场已经不是仅仅满足温饱的时代，消费者跟多追求了食材的品质与口感风味。而家禽这一十分大众的食材，消费者越来越关注其肉产品的品质及风味。肌肉作为家禽胴体的主要组成部分，其质量优良决定了其色泽、嫩度、PH值、肌内脂肪含量、系水力等肉质物理化学指标与肌肉口感[1]。肉质品质需要多个指标来衡量，描述评价肉质的客观性状有肉的色泽、PH值、肌内脂肪含量、系水力等，也包括了一些主观性状包括肌肉嫩度、肉品的多汁度与风味等[2]。
1)PH值:PH值用来评定肌肉酸碱度，畜禽屠宰后，PH的下降快慢是决定汁液渗出度的重要因素[3]。主要通过影响保藏性、加工损失等影响鸡肉肉质质量[4]。
2)嫩度:评定肉质嫩度的重要指标之一是剪切力，剪切力的大小取决于肌纤维的粗细与肌内脂肪含量的多少[5]。剪切值越小，肉质越细嫩，即适口性越好。肌纤维类型也是影响肌肉嫩度的重要参考指标[4]。
2. 研究的基本内容和问题
1)研究目标及内容：本课题旨在研究不同品种鸡及其杂交组合后代胚胎期肉质发展差异。试验选用3个杂交组合进行：红标土鸡♂红标土鸡♀F1代，白羽鸡♂白羽鸡♀F1代，红标土鸡♂白羽鸡♀F1代进行饲养和实验室分析。
试验计划按照孵化9日龄、12日龄、15日龄、18日龄、20日龄采样，并提取其RNA、合成其cDNA、再反转成DNA对如下基因进行检测:
腺苷琥珀酸裂解酶基因（ADSL）、谷酰胺磷酸酰胺转移酶基因（GPAT）、脂肪酸结合蛋白基因（FABP）、脂肪酸合成酶基因(FAS)、脂蛋白酶基因（LPL）、、过氧化物酶体增殖物激活受体（PPAR）、钙蛋白酶抑制酶(CAST)的表达
3. 研究的方法与方案
样品准备部分：
取白羽、红标肉鸡、肉杂种蛋各50枚，依次编号同批放入孵化机内，保持温度在37摄氏度左右，湿度在70%左右，孵化第5天照蛋检验，分别于孵化第9、12、15、18、20天照蛋并随机选取正常发育的胚蛋每品种各5-8枚，进行胸肌与腿肌部分的采样，并保存于液氮中
试验部分：
（1）总RNA提取：
I.去不同时期肌肉组织样品，液氮研磨后加1mlTrizol到细胞（2106PGC）中，反复轻轻吹打，室温静置5分钟后，转入1.5mlEP管；
II.每EP管加入200μl氯仿，在漩涡器上剧烈振荡15-30秒，充分混匀。
III.在4℃下，12,000rpm离心15分钟，离心后管内分三相：下层红色的酚相，中间层为氯仿相，上层为无色的水相；
IV.RNA沉淀：小心吸取400μl上层水相至DEPC处理过的EP管中，加入等体积的异丙醇，室温放置15分钟，4℃，以12,000rpm离心10分钟；
V.弃去上清，用1.5ml75%的乙醇清洗沉淀，剧烈震荡，于4℃以7,500rpm离心10分钟，用微量移液器尽可能将乙醇吸尽，于超净台内放置风干（15分钟左右，切记不可让RNA沉淀过度风干）；
VI.总RNA浓度的测定：用紫外分光光度计（Nanodrop）检测OD260及OD280的值，计算RNA的浓度及OD260/OD280的比值。OD260/OD280（A260/280）可以反映RNA的纯度，1.8～2.1为纯度良好。总RNA浓度（mg/ml）=OD26040稀释倍数。
VII.总RNA完整性检测：取2μl总RNA提取液，用1.5%琼脂糖凝胶进行电泳（电泳槽，制胶板应先经甲醛处理），观察RNA提取情况，判断RNA的完整性。完整的真核细胞总RNA可见到28S、18S两条带。
（2）cDNA的合成：
I.取一灭菌的无RNA酶的EP管，加入1μgRNA模板和1μlOligo(dT)引物，再加入适量DEPC水至12μl；
II.稍离心，70℃水浴5min，迅速置于冰上冷却至室温；
III.依次加入1μl的RNA酶抑制剂、4μl的5Reactionbuffer、2μl的dNTP，稍离心沉淀液体，37℃水浴5min；
IV.加入M-MLV反转录酶（200U/ml）1μl，稍离心；
V.42℃水浴60min，70℃水浴5min终止反应；冰上迅速冷却，所得引物即为cDNA。
（3）用Primer5.0软件设计引物，送至上海生工生物工程技术服务有限公司合成，引物序列及产物长度等如表2-1所示。引物用灭菌的ddH2O稀释至100μM浓度，于-20℃储存；使用浓度为10μM，4℃放置。
（1）PCR的扩增，反应体系为20μl
cDNA模板 | 2.0μl |
10buffer | 2.0μl |
dNTP | 2.0μl |
上游引物 | 1.0μl |
下游引物 | 1.0μl |
Taq酶 | 0.5μl |
ddH2O | 调至总体积20μl |
1)反应条件：
95℃ | 3min | 1cycle |
94℃ | 30s | 34cycles |
58℃ | 30s | |
72℃ | 1min | |
72℃ | 5min | 1cycle |
4℃ | Forever |
1）琼脂糖凝胶电泳
取5μlPCR扩增产物，在1.5%琼脂糖凝胶上进行电泳（100V,1h）。Tanon凝胶成像系统观察并拍照。
4. 研究创新点
不同品种及杂交组合鸡胚胎期胸肌和腿肌组织中肉质相关基因表达差异及对成体肉质的影响。
5. 研究计划与进展
2015.72015.9
（1）实验的前期准备，资料检索，优化实验方案。
（2）种蛋孵化，取不同胚龄鸡胚样品
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