褪黑素对呕吐毒素侵害的卵母细胞的挽救作用开题报告-论文开题网

1. 研究目的与意义、国内外研究现状（文献综述）

Yoshizawa等[1]从污染的玉米中分离得到脱氧雪腐镰刀菌烯醇(Deoxynivalenol，DON)，并根据它能引发母猪拒食和呕吐的特征，将其定名为呕吐毒素(Vomitoxin，VT)。

DON主要由禾谷镰刀菌(Fusarium．graminearum)和黄色镰刀菌(F．culmo rum)产生[2]，该两株菌是引起小麦赤霉病和玉米穗腐病的病原菌[3]。

该毒素在粮谷类原料中污染情况非常普遍，是污染小麦、燕麦、玉米、大麦等粮食（饲料）及其制品的最广泛、最常见真菌毒素。

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1. 研究目标检测呕吐毒素侵害的卵母细胞的成熟情况，从发育能力、亚细胞结构、氧化应激及表观修饰等方面，全面深入地认识呕吐毒素对卵母细胞的毒性及相关机制，探明并报道褪黑素对呕吐毒素侵害的卵母细胞的挽救。

2. 研究内容1）模型建立：确定体外培养卵母细胞的褪黑素及呕吐毒素的起始浓度，以卵母细胞成熟率为筛选指标。

确定卵子质量及发育能力2）亚细胞结构检测：呕吐毒素溶液培养GV期卵母细胞8.5小时，同时褪黑素-呕吐毒素溶液培养GV期卵母细胞8.5小时，检测微管的组装和纺锤体，检测MAPK的定位和表达。

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1）实验方法卵母细胞收集和培养购买3周龄ICR小鼠，动物的饲养和使用均依照南京农业大学动物研究委员会准则。

猪卵巢从当地屠宰场获得。

从卵巢中收集GV期卵母细胞，采用M2培养液稀释的呕吐毒素培养液以及M2培养液稀释的褪黑素和呕吐毒素培养液，覆盖石蜡油后在37/38.5度，5%CO2的培养箱中培养8.5小时。

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1）呕吐毒素在粮谷类原料中污染情况非常普遍，是污染小麦、燕麦、玉米、大麦等粮食（饲料）及其制品的最广泛、最常见真菌毒素，对人类和畜禽的健康危害较大。

目前，对于呕吐毒素的研究大多止步于宏观以及对细胞的免疫毒性、消化道细胞毒性、肿瘤细胞毒性等，呕吐细胞对动物生殖系统的的毒性，特别是对卵子的毒性作用研究较少。

特别是对于如何挽救呕吐毒素侵害的卵母细胞的解决方案有待探寻。

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2017年9月-11月：确定体外培养卵母细胞的褪黑素的浓度，呕吐毒素溶液培养GV期卵母细胞8.5小时，同时褪黑素-呕吐毒素溶液培养GV期卵母细胞8.5小时，检测微管的组装和纺锤体迁移，检测细胞骨架成分。

检测MAPK的定位和表达。

2018年12月-2月：呕吐毒素溶液培养GV期卵母细胞8.5小时，同时褪黑素-呕吐毒素溶液培养GV期卵母细胞8.5小时，检测基因组整体DNA甲基化水平，检测DNMT3A，H3K27me3和H3K4me2水平，检测ROS水平。

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