KIF14在卵母细胞成熟过程中的定位、表达及功能开题报告

 2023-02-16 09:07:00

1. 研究目的与意义、国内外研究现状（文献综述）

细胞周期是细胞生命活动的基本过程，细胞在周期时相的变迁中进入增殖、分化、衰老和死亡等生理状态。

哺乳动物细胞通过细胞周期的调控来实现个体的发育及自我的更新。

细胞周期的调控是一个庞大的非常复杂的网络，各个细胞周期调控因子在这个复杂的网络中既有独立的功能，又有协同作用[1-2]。

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2. 研究的基本内容和问题

1、研究目标：探清KIF14在卵母细胞减数分裂过程种的作用 2、研究内容：（1）KIF14在卵母细胞中的表达和定位；（2）KIF14对卵母细胞极体排出的影响。

（3）KIF14对卵母细胞减数分裂细胞周期和纺锤体构型的影响。

3、拟解决的关键问题： KIF14基因对小鼠卵母细胞成熟过程的作用及机制。

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3. 研究的方法与方案

1、研究方法：（1)小鼠卵母细胞收集和体外培养（2)KIF14siRNA显微注射 （3)免疫荧光染色 （4)免疫蛋白印迹法（Western blot） （5)荧光强度分析和免疫印迹蛋白条带强度分析 2、技术路线：先进行小鼠卵母细胞的收集和体外培养，对其进行KIF14siRNA显微注射。

注射完成后分别进行：（1）免疫蛋白印迹法，并检测KIF14RNA及蛋白水平；（2）选取不同时期的卵母细胞，进行免疫荧光染色，以检测在卵母细胞减数分裂不同时期中KIF14的分布。

最后分析可得知KIF14在小鼠卵母细胞成熟过程中的作用。

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4. 研究创新点

分析了KIF14在小鼠卵母细胞成熟过程中的定位及可能的功能。

5. 研究计划与进展

（1）2017.4-2017.6 项目的筹备；（2）2017.7-2017.9 实验小鼠的购买、饲养及其卵母细胞的采集和体外培养；（3）2017.10-2017.11 对培养好的小鼠卵母细胞进行KIF14siRNA的显微注射，并完成免疫荧光染色和免疫蛋白印迹法的操作；（4）2017.12 使用Image J软件对本试验中微丝进行荧光强度分析，对免疫蛋白印迹法的蛋白条进行灰度分析。

（5）2018.1-2018.4 对实验结果进行数据分析，并撰写论文。

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