鸡肺泡上皮Ⅱ型细胞的原代培养及鸡舍PM2.5的氧化损伤作用开题报告

 2023-02-16 09:07:02

1. 研究目的与意义、国内外研究现状（文献综述）

1、本课题的意义由于规模化鸡场舍内饲养密度过高，通风不良，导致鸡舍内空气质量问题日益突出，特别是舍内空气细颗粒物污染引起鸡气囊炎、慢性呼吸道病等一系列呼吸系统疾病频发。

这些颗粒物中，粒径越小对动物的危害程度越大。

PM2.5被吸入后更容易停留在肺部或者支气管内，甚至直接通过支气管和肺泡进入血液，严重危害鸡群健康，影响养殖生产效益，这已成为目前制约禽业发展的关键因素。

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2. 研究的基本内容和问题

1、研究的目标建立体外鸡肺泡上皮Ⅱ型细胞的原代细胞培养方法，探究鸡舍内PM2.5对鸡肺泡上皮细胞的氧化损伤作用，为鸡舍内家禽的健康保护提供理论基础。

2、研究的内容主要分为两大部分，第一部分是鸡胚肺泡上皮Ⅱ型细胞的分离培养，该部分通过对鸡胚肺组织的取材、消化以及纯化等操作来获取正常的Ⅱ型肺泡上皮细胞，再用碱性磷酸酶染色法鉴定。

第二部分是观察鸡舍PM2.5对Ⅱ型肺泡上皮细胞的毒性损伤作用，该部分通过对Ⅱ型肺泡上皮细胞暴露不同浓度梯度的PM2.5，分析细胞活力和测定氧化应激指标，研究PM2.5对Ⅱ型肺泡上皮细胞的毒性及氧化损伤作用。

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3. 研究的方法与方案

1、研究方法通过建立鸡肺泡上皮Ⅱ型细胞的体外培养方法，研究鸡舍PM2.5对鸡肺泡上皮细胞的毒性损伤作用。

2、技术路线（1）、Ⅱ型肺泡上皮细胞系的建立鸡胚肺组织取材→肺泡上皮细胞分离→肺泡上皮细胞纯化→碱性磷酸酶染色法鉴定→原代培养（2）、细胞活力的测定96孔板培养细胞→加3组不同浓度梯度的PM2.5→细胞培养箱孵育→加MTT→加DMSO→酶标仪检测光密度→结果分析（3）、氧化应激指标的测定ROS、SOD、MDA的检测3、实验方案首先采用恒温水浴振荡仪、CO2培养箱、离心机等实验仪器建立Ⅱ型肺泡上皮细胞系；其次借助MTT试剂盒完成PM2.5对Ⅱ型肺泡上皮细胞的处理并测定出细胞活力；最后借助氧化应激指标检测试剂盒检测被PM2.5处理后的Ⅱ型肺泡上皮细胞的各氧化应激指标。

4、可行性分析（1）理论上：Ⅱ型肺泡上皮细胞是功能性细胞，其功能状态的改变被认为与多种肺损伤和疾病相关。

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4. 研究创新点

（1）首次以鸡为实验动物，研究PM2.5的危害；（2）首次以Ⅱ型肺泡上皮细胞为对象，研究PM2.5的毒性及氧化损伤作用。

5. 研究计划与进展

17年9月17年12月 熟悉Ⅱ型肺泡上皮细胞的分离、纯化及原代培养等基本操作18年2月18年3月完成课题申报、开题报告及Ⅱ型肺泡上皮细胞系的建立18年3月18年4月完成PM2.5对Ⅱ型肺泡上皮细胞的处理并分析细胞活力、测定氧化应激指标18年4月18年5月着手毕业论文的编写及答辩准备

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