团头鲂sirt4和sirt6基因克隆及其在高糖应激中的表达变化开题报告

 2023-02-16 09:07:03

1. 研究目的与意义、国内外研究现状（文献综述）

哺乳动物的沉默信号调节子（Silent information regulator）是酵母Sir2的同源蛋白质, 随着Sir2同源基因相继在其他物种中克隆，现已将各物种的Sir2同源蛋白质统称为Sir2相关酶类Sirtuins家族。

Sirtuins是一种从细菌到人类高度保守的且依赖于NAD 的蛋白质去乙酰化酶和(或)ADP核糖基化酶(Histone Deacetylase Class Ⅲ, HDACs Ⅲ)[1, 2]。

在高等哺乳动物中Sirtuins家族具有7个成员分别命名为SIRT1-7，该家族成员广泛存在于细菌、真菌以及所有的真核生物体中, 涉及转录、细胞周期、细胞分化、凋亡、应激、代谢及基因组稳定的调控[3, 4]。

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3. 研究的方法与方案

研究方法1、用0.75%的生理盐水配制的口服浓度为3g/kg 的葡萄糖溶液灌喂体质正常，规格均一的团头鲂（平均体重为80 g1 g）2、分别在0 h（对照组）、0.5 h、1 h、2 h、4 h、8 h、12 h、36 h、48 h时间点采集组织：鳃、脑、肌肉、皮肤、肝、肾、头肾、脾、心、肠，每个时间点采集三个重复（即三条鱼）3、用RNAiso Plus提取组织RNA，配制成40 ng/ml的RNA溶液4、应用 Applied Biosystems 7500 Fast Real-Time PCR System 和 StepOnePlus Real-Time PCR System 的操作方法进行荧光定量，检测团头鲂SIRT4、SIRT6基因在口服葡萄糖后，在不同时间内在各组织的表达变化。

5、SPSS统计学分析技术路线:见附件可行性分析1. 立项依据有坚实的理论与实践基础在课题组前期研究中发现，在不同营养条件下，不同组织中SIRT1的mRNA表达水平不同，相似的表现为肾脏和肠道组织中SIRT1的表达量显著高于脾脏、肝脏和脑组织，呈现出组织的特异性表达，但有趣的是，五个不同组织中的SIRT1基因的表达量没有因日粮碳水化合物含量的增加而变化。

有趣的是，SIRT1和SIRT4在调控胰岛素分泌时的作用相反。

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4. 研究创新点

迄今，有关鱼类糖代谢的研究主要聚焦生理生化和基因表达的水平，鲜少关注糖脂代谢酶调控因子SIRT4和SIRT6，本研究从相关基因在代谢过程中的时空表达分布入手，探讨鱼类提高糖调控的生理响应，可为鱼类糖代谢调控提供生物靶标基因。

本研究内容具有一定创新性。

5. 研究计划与进展

（1）、2017年7月-8月：实验试剂的购买及配置，熟悉相关仪器的使用，开展预备实验；（2）、2017年9月-10月：暂养实验所需的团头鲂两周后开始灌喂实验，按时间点采集样品并置于液氮或-80。

C冰箱中保存；（3）、2017年11月-12月：样品组织RNA的提取，并配制40 ng/ml的RNA溶液储存于-80。

C冰箱；（4）、2017年12月-2018年1月：进行荧光定量；（5）、2018年2月-4月：实验结束，进行数据处理，撰写论文，项目总结（6）、2018年5月：论文答辩预期进展1、 成功进行高糖灌喂实验，采集样品组织并进行RNA的提取及荧光定量2、 根据实验数据，找出正常情况下SIRT4、SIRT6在各组织中的分布情况（基因定位不同，分布不同），找出表达量最高/最低的组织，表达量相同组织和差异最大的组织（分布不同，功能不同）。

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