1. 研究目的与意义、国内外研究现状(文献综述)
1.课题的意义:黄颡鱼(Pelteobagrus fulvidraco )作为当今水产养殖的一大类,但是由于现在养殖过于盲目,以利润为重,大幅度增加养殖密度,种间杂交,近亲繁殖,导致黄颡鱼抗病性下降,生产率低下。
另一方面由于生活环境破坏,过度捕捞,野生鱼种越来越少,为了能够更加优化养殖方法,我们对其研究不应该停留在个体层面,应该深入到分子层面,运用分子生物学手段,避免黄颡鱼的近亲繁殖,维持其种群多样性,遗传物质的多样性,对于保证黄颡鱼养殖产业经济价值具有重大意义。
黄颡鱼的遗传多样性通常从形态特征、细胞学特征、生理生化特征、DNA序列特征等不同层次来标记区别。
2. 研究的基本内容和问题
1.目标:我的课题拟在通过对来自三个不同水域的的黄颡鱼样本,进行DNA的提取,PCR扩增,电脑测序,研究不同水域的环境对黄颡鱼的影响,导致其遗传物质的差别。
2.内容:实验样品分别取自阳澄湖,长荡湖,常熟的黄颡鱼肌肉或鳍条,取其小片组织,进行DNA精提取,分成3组,每组DNA样品12个,分别标记为(YC01,YC02YC12),(CD01,CD02CD12),(CS01,CS02CS12).然后进行PCR扩增,凝胶电泳,选择条带清晰且长度在600至700bp的条带为目标条带,交由无锡天霖科技有限公司进一步测序,最后使用专业软件进行数据处理与分析。
3,关键问题:1.实验中,所选取的引物十分重要,需要通过配置混合模板,来检验哪种引物较为合适。
3. 研究的方法与方案
1.研究方法:①精提取DNA:(1)取不超过25mg组织,经液氮充分研磨后(或者尽肯能剪切成小的碎片),放入离心管中,加入200μl Solution L,旋涡振荡15秒。
(2)加入20μl Proteinase K,旋涡混匀,简短离心,使管壁上的溶液收集到管底。
56℃孵育,直至组织完全溶解,短暂离心,使管壁上的溶液收集到管底。
4. 研究创新点
创新:对于苏南长荡湖,阳澄湖,常熟等三个水域的黄颡鱼遗传物质的多样性研究以前还是比较少的。
5. 研究计划与进展
1.研究计划:(1)2017年7月20日,确认课题。
备注:请教导师关于课题方面的问题以初步确认具体研究方向和实验方案。
(2)2017年9月到12月,DNA精提取。
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