1. 研究目的与意义
人肺癌耐药细胞株的建立为药物逆转细胞耐药提供实验基础以及对研究如何治愈肺癌患者具有重要的意义，有良好的理论和应用研究价值。
用抗癌代表药紫杉醇间歇作用体外诱导建立A549/Taxol，MTT法检测耐药细胞株的耐药指数以及倒置显微镜下观察亲本细胞株和耐药细胞株药物作用前后的细胞形态变化。2. 文献综述
文 献 综 述
肺癌严重威胁人类生命与健康，其发病隐匿，进展迅速，约2/3的患者确诊时已失去了手术机会，而化疗是综合治疗中的主要措施之一[4]。肺癌细胞对化疗药物的耐药性特别是多药耐药性（MDR）是导致肺癌化疗失败的重要原因[8]。因此，人们一直致力于建立细胞耐药模型，并以此为模型寻找较为敏感的预测疗效的分子指标，筛选有效的耐药逆转剂[6]。
常用的抗癌药有长春新碱、紫杉醇、多西紫杉醇、顺铂、依托泊苷、阿霉素。其中紫杉醇是美国百时美-施贵宝公司开发的一个全新植物抗癌药[5]。它是一种在红豆杉科（Taxaceae L.）红豆杉属（Taxus L.）生长缓慢的常绿乔木中分离提取到的天然化合物，1993年10月首次在美国上市，国内首次上市的时间为1995年，属于抗微管类抗癌药，是目前公认的疗效最好、抗癌谱最广的药物之一，对肺癌疗效显著[11]。它作用的药理是细胞接触紫杉醇后会在细胞内积累大量的微管，这些微管的积累干扰了细胞的各种功能，特别是是使细胞分裂停止于有丝分裂期，阻断了细胞的正常分裂。紫杉醇的这种独特的药理作用加快了其临床研究的步伐，1982年Ⅰ期临床试验开始，1989年就完成了Ⅱ期临床试验，并于1990年进入Ⅲ期临床试验，并证实了对卵巢癌和乳腺癌的疗效[10]。经过多年的不断研究，发现紫杉醇对许多不同类型的癌症都有不同程度的疗效，尤其是严重威胁人类健康的肺癌[15]。另外，紫杉醇的改良版多西紫杉醇是是对紫杉醇进行结构修饰改造得到的，是迄今研究发现的疗效最显著的抗癌药物之一，以及它的抗癌活性是紫杉醇的十倍，并且具有广谱的抗白血病和抗体体肿瘤活性，已经成为世界抗癌研究领域关注的焦点[7]。
3. 设计方案和技术路线
本实验主要建立人肺癌耐药细胞株，为治愈肺癌的研究提供基本的耐药株，解决肺癌细胞的耐药问题，为药物逆转细胞耐药提供实验基础。
方法是用抗癌代表药紫杉醇以逐步递增浓度，间歇作用体外诱导法建立获得性耐药细胞株A549/Taxol；MTT法检测耐药细胞株的耐药指数；倒置显微镜下观察亲本和耐药细胞株药物作用前后的细胞形态学变化；细胞计数法描绘耐药和亲本细胞株的生长曲线和群体倍增时间；流式细胞仪分析细胞周期分布。
细胞建立完成后,对其进行IC50的测定，以耐药倍数达10倍以上为最佳。4. 工作计划
目前方案已经制定好，各物料已经采购到位，部分实验工作已经开展，经过初步表型实验检测（MTT分析细胞生长曲线），发现：紫杉醇对于人肺癌细胞的生长有明显抑制作用。
5. 难点与创新点
紫杉醇是人类医学中使用广泛的一类重要药物，而紫杉醇是抗癌药中使用最为广泛的，通过本课题研究紫杉醇对人肺癌细胞的作用以及通过控制紫杉醇浓度来观察是否会对人肺癌细胞起到抑制作用而又不会对人类产生健康威胁。
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