1. 研究目的与意义
一、研究内容体内外实验观察千层纸素A(Oroxylin A)对肝纤维化及HSC活化的影响1、体内实验:主要有血清检测和病理切片检测,检测肝纤维化相关指标、炎症相关指标。
2、体外培养HSC:观察千层纸素A对HSC增殖与凋亡的影响;检测内质网应激相关指标。
二、研究意义肝纤维化(liver fibrosis)是继发于各种形式慢性肝损伤之后组织修复过程中的代偿反应,伴有细胞外基质(extracellular matrix, ECM)的大量产生并沉积于肝脏,损害肝脏的正常功能过度生成ECM并沉积于肝脏。
2. 文献综述
内质网应激调控活化型肝星状细胞凋亡的机制研究摘 要: 内质网 ( endoplasmic reticulum, ER ) 是细胞内一种重要的细胞器,由于各种原因引起的错误折叠与未折叠蛋白在腔内聚集以及Ca2 平衡紊乱的状态,称为内质网应激 ( endoplasmic reticulum stress, ERS ) 。
ERS是一种重要的细胞自我防御机制,持续的ERS将启动细胞凋亡途径。
肝星状细胞 ( hepatic stellate cells, HSC ) 内有大量的ER,很多肝脏疾病都与ERS及其介导的细胞凋亡有关。
3. 设计方案和技术路线
一、研究方案体外培养HSC: 设立空白组,给药低中高剂量组:1、观察Oroxylin A对HSC 活化影响 检测指标包括: HSC凋亡情况:TUNEL染色、流式细胞仪,Western blot 检测HSC凋亡情况: Bax、Bcl-2、cleaved-caspase 3、PARP表达; 2. 检测ERS相关指标1)Western Blot检测:Chop,GRP78表达; 2)PCR检测内质网应激标志物CHOP表达。
二、技术路线
4. 工作计划
1.通过查阅文献对肝纤维化有了基本认识,并且学习了Oroxylin A通过内质网应激调控活化型HSC凋亡的机制研究相关知识。
2.根据设计的方案进行实验。
3.整理实验数据。
5. 难点与创新点
本课题应用多种先进的分子生物学技术手段,如Western blot、Real-time PCR、免疫荧光染色等,且还运用多种先进仪器如流式细胞仪、荧光显微镜等。
相比于传统的实验方法具有速度快、运用范围广的优点,能弥补实验方法难以克服的缺点
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