1. 研究目的与意义
内容:在本论文设计中,通过合成可以特异性吸附内毒素的特定的DNA序列,并在其表面连接荧光素作为信号官能团。
该DNA荧光分子在水溶液状态下不产生荧光,但当其特异性吸附内毒素,凝聚产生荧光。
利用这种原理可作内毒素含量检测。
2. 文献综述
内毒素的性质及相关研究摘 要:内毒素是革兰氏阴性菌和某些蓝藻细胞壁上的脂多糖(LPS)复合物,主要由菌体死亡解体后释放,是常见的外源性致热原,具有强免疫刺激能力,与人类多种疾病密切相关。
内毒素分子的耐受力好,耐热性强,不易被常规方法去除。
内毒素可通过多种暴露途径导致机体潜在的健康风险,成为近年来研究的热点。
3. 设计方案和技术路线
1.DNA序列的选择;2.通过红外、紫外全扫、高效液相色谱,对荧光素1-(4-羧基苯)-1,2,2-三苯乙烯进行分析;3.将1-(4-羧基苯)-1,2,2-三苯乙烯与DNA序列相连,通过红外、紫外和高效液相分析并与之前的检测结果进行对比;4.内毒素检查用水用复溶内毒素冻干剂,再将其配制一定浓度梯度(2λ、λ、0.5λ、0.25λ、0)的内毒素溶液,调节反应时间、反应温度、溶液PH,与一定量连有信号官能团的DNA进行特异性吸附反应,平行测定4次作对照实验,并对不同实验条件下的溶液进行荧光检测;5.,对实验数据进行分析处理,摸索出内毒素与DNA链特异性吸附的最佳反应条件及聚集诱导荧光检测的检测限。
4. 工作计划
1月4号1月19号确定课题方向,查阅大量文献书籍,撰写文献综述2月20号2月28号 购买实验试剂,预约实验仪器,做好实验前期准备。
3月1号3月15号设计具体实验步骤,完成开题报告。
3月16号5月15号 摸索实验条件,进行具体实验操作,并处理实验结果。
5. 难点与创新点
1.在研究细菌内毒素的检测过程中,发现有研究利用聚集诱导荧光技术测定溶液状态的肝素糖胺聚糖大分子,其原理在于荧光信号分子在水溶液状态下不产生荧光,但当其吸附肝素后聚集产生明显的荧光效应。
此技术操作简便,材料易得,故考虑将其用于内毒素的检测中。
2.DNA链可与内毒素产生特异性吸附,且DNA链表面易于被修饰,从而连接荧光素作为信号官能团,在吸附聚集后产生荧光,用于实验结果的检测与分析。
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