1. 研究目的与意义
海藻糖由食用级淀粉酶解而成为两个吡喃环葡萄糖分子以1,1-糖苷键连接而成的非还原性双糖,有3种异构体即海藻糖(α,α)、异海藻糖(β,β)和新海藻糖(α,β),并对多种生物活性物质具有非特异性保护作用。
海藻糖在医学上的应用主要是作为诊断药的稳定剂,例如,应用于移植内脏器的储存、淋巴激素、生物制剂、抗生素、维生素、酶以及各种容易失去活性的物质改良与稳定。
海藻糖也可用于牙膏、内服药、糖衣片剂等中作为甜味剂、呈味改良剂、品质改良剂、稳定剂。
2. 课题关键问题和重难点
对于海藻糖的质量分析中的关键问题是海藻糖液相条件的确定、标准曲线及线性回归方程的确定、海藻糖样品组分的定性定量分析、仪器精密度的考查、检出限、定量限的确定、方法专属性的考察。
选用示差折光检测器(柱温:35 ℃;流动相:V乙腈∶V水=4∶1,配好后加0.1%氨水;流速:1.0 mL/min;检测器温度:40 ℃,在此基础上根据实际出峰情况对流动相配比进行微调)标准曲线及线性回归方程:用超纯水分别配制质量浓度分别为62.5、125、625、2500、6250、10000 ugL-1的海藻糖标准溶液,分别进样25uL,经HPLC分析后绘制标准曲线,得到线性回归方程和相关系数(R2)。
海藻糖样品组分的定性定量分析:分别进1%的葡萄糖、麦芽糖和海藻糖的标准品,根据保留时间定性分析,根据外标法进行定量分析,然后进混合标准品。
3. 国内外研究现状(文献综述)
摘要:海藻糖是一种被称为生命之糖的非还原性二糖,有使细胞膜及蛋白质等生物大分子稳定的作用,能使干燥脱水后的生物体以极低乃至停止新陈代谢的形式被保护。
[1] 目前对海藻糖、甘露醇和阿糖醇检测分析方法主要有比色法、酶水解法和色谱法。
[2]对海藻糖含量的分析通常采用高效液相色谱法,所不同的是色谱柱及检测器的选择。
4. 研究方案
仪器与试剂:高效液相色谱仪、电子天平、乙腈、超纯水等1、专属性分别精密吸取1mL海藻糖对照品与样品储备液至100mL容量瓶中,定容,吸取25uL溶液进样,与空白溶液及各种可能的杂质如葡萄糖溶液进样分析对比。
2、检测限与定量限测定精密吸取一定量的对照品储备液分别配制成2、4、6、8、10 ugL-1的对照品溶液,吸取25uL溶液进样3次分析,以约3 S/N为检测限,10 S/N为定量限。
3、线性范围与回归方程精密吸取一定量对照品储备液分别配制成62.5、125、625、2500、6250、10000 ugL-1的对照品溶液,分别进样25uL,以峰面积与对照品的浓度进行回归。
5. 工作计划
第1周 (1)按指导教师指定的英文原文进行翻译,完成翻译工作;(2)检索与阅读相关专业文献,写出文献综述,按时提交开题报告。
第2~3周(1)大量查阅文献,初步确立海藻糖的分析检测方法(确定色谱柱、检测器类型、流动相、柱温等色谱条件);(2)学习分析仪器的基本操作、实验规范与相关知识。
第4~6周(1)按初定的实验方案对海藻糖样品进行质量分析,根据实验结果对分析条件进行优化(调节流动相配比、流速等参数,保证分离度等满足测定要求,确保检测结果满足2022版中国药典的要求);(2)继续查阅文献,对实验中出现的问题进行分析,对分析条件进行优化。
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