1. 研究目的与意义、国内外研究现状(文献综述)
在自然界里,植物在生长发育过程中长期暴露在充满来自于昆虫、病毒、细菌、真菌和卵菌等带来的各种威胁,这些威胁可以直接影响植物的生存以及作物的产量。
它们与植物之间的互作是非常复杂多样的,又可以分成腐生菌、致病菌、共生菌等。
植物在面对来自于自然界的威胁时,需要启动防御系统来抵抗外界入侵。
2. 研究的基本内容和问题
研究目标:1、通过差异组学分析获得MoSwa2胞外液蛋白MoAPX。
2、通过pull-down实验及质谱分析筛选MoAPX的互作蛋白。
3、对MoApx及其互作蛋白进行一对一互作验证。
3. 研究的方法与方案
研究方法:构建pEGX-4T-2-MoAPX载体及提取稻瘟病菌侵染阶段水稻总蛋白,进行pull-down实验,鉴定MoApx互作蛋白;筛选出MoAPX的互作蛋白后利用(Co-IP、BiFC等方法)进行一对一互作验证;技术路线(实验方案):1、通过差异组学分析获得MoSWA2胞外液蛋白MoAPX2、构建pEGX-4T-2-MoAPX载体3、纯化GST-MoApx蛋白4、提取水稻互作阶段蛋白5、GST-MoApx和水稻蛋白孵育,挂GST珠子,洗脱蛋白,质谱鉴定6、对鉴定的互作蛋白进行一对一验证(Co-IP、BiFC) 可行性分析:实验平台理论可行、技术可行、条件满足、实验的制定符合客观实际。
4. 研究创新点
水稻-稻瘟病菌互作是一个复杂的过程,互作引起的形态、生理等上的变化涉及许多复杂因子的共同调控,现在对于稻瘟病菌通过外泌途径将一些外泌蛋白及效应因子分泌到水稻寄主中,从而来抑制寄主的免疫反应是现在研究稻瘟病菌与水稻互作机制的热点之一。
但是目前对于一些具有酶活的外泌蛋白如何参与调控稻瘟病菌致病性和与水稻的互作过程的研究相对较少,如果能够清楚的知道受MoSwa2调控的抗坏血酸途径相关的酶参与调控稻瘟病的致病机制及其与水稻寄主靶标间的互作关系,将为研究水稻与稻瘟病菌相互作用的机制提供一个全新的方向,而应用这些机制将能建立水稻防御稻瘟病菌入侵的作用模型,并可促进形成更有效和更具有针对性的水稻抗病育种体系。
5. 研究计划与进展
2018年8月-2018年10月1)构建pEGX-4T-2-MoAPX载体2)纯化GST-MoApx蛋白,提取水稻互作蛋白;3)筛选MoAPX互作蛋白2018年11月-2019年3月通过Co-IP、BiFC等方法对鉴定到的互作蛋白进行一对一互作验证2019年3月-2019年4月课题总结,实验数据整理后完成论文撰写预期进展1)学会基本的分子遗传操作技术;2) 掌握分子生物学各项技术原理;3)掌握稻瘟病菌功能基因研究遗传操作体系;4)发表SCI论文一篇。
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